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抗環(huán)血酸氧化酶（AAO）檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0556 | 售價（元） | 1320 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0556 |
抗環(huán)血酸氧化酶（AAO）檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100T/96S |
測定意義：
AAO是定位于植物細(xì)胞壁的糖蛋白，屬“藍(lán)銅氧化酶”家族。細(xì)胞壁內(nèi)的抗壞血酸和AAO與細(xì)胞壁的代謝和生長有著密切的聯(lián)系。AAO 氧化 AsA 所形成的 MDHA 可通過質(zhì)膜上的細(xì)胞色素b還原，該過程中電子的跨膜運(yùn)輸能夠促進(jìn)細(xì)胞生長。
測定原理：
AAO可直接氧化AsA，通過測定AsA的氧化量，可計算得AAO活力。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0556-100T/96S |
Storage |
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試劑一：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
20ml |
4℃ |
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試劑三：粉劑 |
1瓶 |
4℃ |
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說明書 |
一份 |
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試劑三：粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加入2ml蒸餾水充分溶解。
自備儀器和用品：
低溫離心機(jī)、紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板（UV板）、可調(diào)式移液器、研缽、冰、蒸餾水。
粗酶液提?。?/span>
按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml試劑一）進(jìn)行冰浴勻漿。16000g，4℃離心10min，取上清置冰上待測。
AAO測定操作：
1. 分光光度計/酶標(biāo)儀預(yù)熱30 min，調(diào)節(jié)波長到265 nm。
2. 試劑二在25℃水浴鍋中預(yù)熱30 min。
3. 依次在微量石英比色皿/96孔板中加入20μl上清液、170μl預(yù)熱的試劑二和10μl試劑三，迅速混勻后在265nm測定10s和130s光吸收A1和A2，△A =A1-A2。
AAO活性計算公式：
a.使用微量石英比色皿測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
AAO活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
= 92.4×△A÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
AAO活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。
AAO(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 92.4×△A÷W
ε：AsA在265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol/cm；d：比色皿光徑（cm），1 cm； V反總：反應(yīng)體系總體積（L），200μl=2×10-4 L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（ml），20μl=0.02 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；
T：催化反應(yīng)時間（min），2min。
b.使用96孔板測定的計算公式如下
(1). 按蛋白濃度計算
AAO活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。
AAO(nmol/min /mg prot) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(Cpr×V樣)÷T
=184.8×△A÷Cpr
(2). 按樣本質(zhì)量計算
AAO活性單位定義：25℃中每克樣本每分鐘氧化1nmol AsA 為1個酶活單位。
AAO(nmol/min/g 鮮重) = △A÷(ε×d）×V反總×109÷(W×V樣÷V樣總)÷T
= 184.8×△A÷W
ε：AsA在265nm處摩爾吸光系數(shù)為5.42×104 L/mol/cm；d：96孔板光徑（cm），0.5 cm； V反總：反應(yīng)體系總體積（L），200μl=2×10-4 L；106：1mol=1×106μmol；Cpr：上清液蛋白質(zhì)濃度（mg/ml），需要另外測定，建議使用本公司BCA蛋白質(zhì)含量測定試劑盒；W ：樣品質(zhì)量；V樣：加入反應(yīng)體系中上清液體積（ml），20μl=0.02 ml；V樣總：提取液體積，1 ml；
T：催化反應(yīng)時間（min），2min。
注意事項:
配制好的試劑放在4℃保存，三天內(nèi)使用完。