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糖原合成酶（GCS）檢測試劑盒（微量法 100T/96S）
| 貨號 | SH0491 | 售價(jià)（元） | 2400 |
| 規(guī)格 | 100T/96S | CAS號 |
- 產(chǎn)品簡介
- 相關(guān)產(chǎn)品
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貨號 |
名稱 |
規(guī)格 |
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SH0491 |
糖原合成酶（GCS）檢測試劑盒（微量法 100T/96S） |
100管/96樣 |
正式測定前務(wù)必取2-3個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
GCS（EC 2.4.1.11）催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UTP，以α-1，4-糖苷鍵相連延長糖鏈，是肝和肌肉糖原合成酶的限速酶，是胰島素作用的主要靶酶，對糖代謝的調(diào)節(jié)和血糖穩(wěn)態(tài)的維持具有重要作用。
測定原理：
GCS催化UDPG和葡萄糖殘基生成糖原和UDP，丙酮酸激酶和乳酸脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADH氧化生成NAD+，在340nm下測定NADH下降速率，即可反映GCS活性。
組成：
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產(chǎn)品名稱 |
SH0491-100T/96S |
Storage |
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提取液：液體 |
100ml |
4℃ |
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試劑一：液體 |
18ml |
4℃ |
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試劑二：液體 |
2.5ml |
4℃ |
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試劑三：液體 |
16.4μl |
4℃ |
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試劑四：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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試劑五：粉劑 |
1支 |
-20℃ |
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說明書 |
一份 |
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自備儀器和用品：
分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1ml提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、 分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零。
2、 工作液的配制：臨用前將試劑三和試劑四轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
3、 試劑五的配制：臨用前在試劑五中加入1ml試劑二充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
4、 將工作液和試劑五置于37℃預(yù)熱5分鐘。
5、 在1ml微量石英比色皿或96孔板中加入10μl樣本、10μl試劑五和180μl工作液，立即混勻，記錄340nm處初始吸光值A1和1min后的吸光值A2，計(jì)算ΔA=A1-A2。
注意：在該試劑盒中，若ΔA大于0.1，需將樣本用提取液稀釋適當(dāng)倍數(shù)后測定，使ΔA小于0.1可提高檢測靈敏度。計(jì)算公式中乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)。
GCS活性計(jì)算：
a.用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GCS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=3215×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GCS（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=3215×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：比色皿光徑，1cm；V樣：加入樣本體積，0.01 ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。
b.用96孔板測定的計(jì)算公式如下
（1）按樣本蛋白濃度計(jì)算
單位定義：每mg組織蛋白每分鐘消耗1nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GCS（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(V樣×Cpr) ÷T=6430×ΔA÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算
單位定義：每g組織每分鐘消耗1 nmol NADH定義為一個酶活力單位。
GCS（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V反總÷（ε×d）×109]÷(W ×V樣÷V樣總)÷T=6430×ΔA÷W
V反總：反應(yīng)體系總體積，2×10-4 L；ε：NADH摩爾消光系數(shù)，6.22×103 L / mol /cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V樣：加入樣本體積，0.01ml；V樣總：加入提取液體積，1 ml；T：反應(yīng)時(shí)間，1 min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g。