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1.產(chǎn)品信息

2.產(chǎn)品簡(jiǎn)介

PKMITO??系列的Red、Orange?及Deep Red 具有非常低的化學(xué)毒性、光學(xué)毒性和優(yōu)秀的線粒體定位能力，適用于活細(xì)胞線粒體成像。除此之外，此系列產(chǎn)品也已經(jīng)在斑馬魚(yú)等小動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中用于線粒體成像。PKMO FX 在細(xì)胞經(jīng)醛類固定液固定后依然有高的線粒體熒光保留，適用于固定細(xì)胞線粒體成像。綜合這些優(yōu)異的性能，PKMITO??系列產(chǎn)品非常適合用于多種場(chǎng)景下的線粒體成像，尤其在SIM?和STED 等超分辨成像和細(xì)胞分選等領(lǐng)域。

3.?實(shí)驗(yàn)步驟

活細(xì)胞線粒體染料可參考以下步驟：

3.1 在PK?Mito?Red/?Orange/?Deep Red中加入100?μL（25 nmol）/20μL(5 nmol)新鮮干燥的?DMSO，混合均勻，得到250 μM母液。

3.2 將培養(yǎng)基預(yù)熱至37?℃，將PK?Mito?Red/?Orange/?Deep Red母液按照1000 - 5000倍稀釋比例加入到預(yù)熱的培養(yǎng)基中，稀釋后的染液建議盡快使用，久置后可能導(dǎo)致部分染料分解或沉淀。

3.3 吸去細(xì)胞原有的培養(yǎng)基，更換為稀釋好的培養(yǎng)基染液，在培養(yǎng)箱中孵育15分鐘。

3.4 用預(yù)熱的培養(yǎng)基清洗細(xì)胞一至兩次，即可用于熒光成像。

注：我們建議對(duì)大多數(shù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞使用200-300 nM，如HeLa、COS7、U-2OS、Vero細(xì)胞、原代神經(jīng)元、脂肪細(xì)胞和肝細(xì)胞；對(duì)組織染色使用500-600 nM。

不同樣品染色條件有所差異，建議起始染色方法為1000倍稀釋，15分鐘染色，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際染色效果進(jìn)行調(diào)整。

固定細(xì)胞線粒體染料可參考以下步驟：

3.5?在PK Mito Orange Fix 中加入100μL（50?次）/ 20 μL（10 次）新鮮干燥的DMSO，混合均勻，得到250 μM?母液。

3.6?將培養(yǎng)基預(yù)熱至37 ℃，將PK Mito Orange Fix 母液500 倍稀釋加入到預(yù)熱的培養(yǎng)基中，得到500nM 的染色工作液，稀釋后的染液建議盡快使用，久置后可能導(dǎo)致部分染料分解或沉淀。

3.7 吸去細(xì)胞原有的培養(yǎng)基，更換為稀釋好的培養(yǎng)基染液，在培養(yǎng)箱中孵育20 分鐘至90 分鐘。

3.8 用預(yù)熱的培養(yǎng)基清洗細(xì)胞一至兩次，即可用于活細(xì)胞熒光成像。

3.9 用預(yù)熱的PBS 緩沖液清洗細(xì)胞兩次，加入預(yù)熱的2.5%戊二醛或4%多聚甲醛等醛類固定液固定15 分鐘。用PBS 緩沖液清洗細(xì)胞后，即可用于固定細(xì)胞成像。

注：我們建議對(duì)大多數(shù)細(xì)胞系和原代細(xì)胞使用500 nM?濃度染液作為起始點(diǎn)優(yōu)化染色條件，如HeLa、COS7、原代神經(jīng)元、心肌細(xì)胞等。

不同樣品染色條件有所差異，建議起始染色方法為500 倍稀釋，20 分鐘染色，請(qǐng)根據(jù)實(shí)際染色效果進(jìn)行調(diào)整。維拉帕米（Verapamil）可以在染色中加入，有助于得到更明亮均勻的染色線粒體。

4.染料光學(xué)性能

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